酶免疫技术的概念、特点以及作用底物：

　　1：概念：酶免疫技术是将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。

　　2：酶免疫技术特点：既保留了抗体或抗原的免疫学活性，又保留了酶对底物的催化活性和生物放大作用。可通过酶对底物的显色反应，对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析，提高了抗原抗体反应的敏感性。

　　3：常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP);碱性磷酸酶(AP)β-半乳糖苷酶(β-Gal)。

　　4:常用酶的作用底物：

　　(1)邻苯二胺(OPD)：是ELISA中应用最早的底物，HRP的敏感底物之一。在HRP的作用下显橙黄色，加强酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。但稳定性差，易变色，具有致癌性。

　　(2)四甲基联苯胺(TMB)：HRP新型底物。经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。TMB具有稳定性好，成色无需避光，无致突变作用等优点。缺点是水溶性相对较差。

　　(3)对-硝基苯磷酸脂(p-NPP)：p-NPP经碱性磷酸酶作用后的产物为黄色对硝基酚

　　(4)4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)：β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物。

　　5：酶联免疫吸附实验(ELISA)

　　(1)双抗体夹心法：此方法是检测抗原最常用的方法，根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量检测。

　　(2)双位点一步法：此方法也用于检测抗原，是针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的决定簇的两种单克隆抗体，即包被使用一种单抗，酶标记使用另一种单抗。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量检测。

　　(3)竞争法：主要用于测定小分子抗原。大分子抗原因其具两个以上的抗原决定簇，多采用双抗体夹心法测定，而小分子半抗原(药物、激素等)只有一个抗原决定簇，只能采用竞争法测定。间接法

　　(4)间接法和双抗原夹心法：检测抗体最常用的方法，属非竞争性结合试验。

　　(5)捕获法：又称反向间接法。主要用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定，目前最常用的是病原体急性感染诊断中的IgM型抗体。

　　【例题】

　　下列酶-底物-颜色反应组合中，正确的是()

　　A.HRP-OPD-蓝色

　　B.HRP-TMB-红色

　　C.AP-p-NPP-黄色

　　D.HRP-p-NPP-蓝色

　　E.AP-TMB-蓝色

　　答案：C

　　【解析】对-硝基苯磷酸脂p-NPP经AP作用后的产物为黄色。